Антоний, Иоанн и Евстафий жили в XIV столетии, и имея знатное происхождение, несли службу при дворе Литовского князя Ольгерда. В княжестве уже было распространено христианство, но трое родственников все еще оставались язычниками.

Благодаря священнику Нестору, который был духовником жены Ольгерда княжны Марии, братья Нежило и Кумец просветились словом Христовой истины, и тайно приняли крещение с именами Антоний и Иоанн. Они отказались от прошлой жизни в язычестве, впредь не стригли волос и не брили бород, как было заведено в княжестве. К тому же перестали вкушать мясо в постные дни.

Сам князь был терпеливым к христианам, но после смерти жены попал под влияние огнепоклонников. О принятии Антонием и Иоанном христианства языческие жрецы доложили князю, который потребовал объяснений у своих приближенных. Братья сознались, что теперь они христиане, и когда отказались вернуться к язычеству были схвачены и посажены в темницу. После года заточения Иоанн не выдержал тяжелых условий – он сбрил бороду и стал питаться мясом в Великий пост. Иоанна освободили, освободили и брата, надеясь, что он последуют его примеру.

Однако, Антоний оставался твердым в вере и вновь оказался в темнице. Это событие вызвало раскаяние в содеянном поступке у Иоанна, и он также был арестован. В темнице их посетил священник Нестор, причастивший и укрепивший узников.

Через год Антоний и Иоанн после жестоких пыток были повешены на дубе. Это произошло в апреле 1347 года. Мучеников похоронили в храме святого Николая в Вильно (ныне Вилюнюс).
Родственник братьев Круглец, придворный князя Ольгерда, также был крещен отцом Нестором с именем Евстафий. Он имел большой почет у князя и был уважаем при дворе.

Евстафий решил открыто исповедовать христианство, и не ел мяса в Великий, а затем и Рождественский пост. Разгневанный правитель приказал казнить Евстафия – в декабре того же года он был повешен на том же дереве, что и его родственники. Его тело погребли рядом с братьями Антонием и Иоанном.

По прошествии времени тот самый дуб был срублен, а на его месте возвели церковь Пресвятой Троицы, престол для которой изготовили из ствола срубленного дерева. В храм перенесли мощи трех мучеников.

В 1374 году часть мощей святых перенесли в Константинополь, где от них происходили чудеса. Поэтому святой Патриарх Филофей установил официальное почитание этих мучеников.

В XVII столетии мощи Антония, Иоанна и Евстафия перенесли в главный храм Свято-Духова монастыря Вильно, где они были помещены под алтарем. Лишь в первой половине XIX столетия святыни открыли для поклонения верующих.

В годы Первой Мировой войны мощи вывезли в Донской монастырь Москвы, а в 1920 году распоряжением властей были перенесены в музей атеистической пропаганды. В 1946 году, ходатайством Патриарха Алексия I, мощи возвратили в Вильнюс, где до 1997 года они хранились в пещерной церкви Свято-Духова соборного монастырского храма, а затем были перенесены в саму церковь.

Память мучеников Антония, Иоанна и Евстафия отмечается 27 апреля.